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細胞培養(yǎng)服務具體步驟及要求如下

更新時間:2022-12-12      點擊次數(shù):969
 
  細胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)服務是伊萊博生物的基礎服務項目之一。
  細胞培養(yǎng)服務也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術。不論對于整個生物工程技術,還是其中之一的生物克隆技術來說,細胞培養(yǎng)都是一個*的過程,細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)??寺 <毎囵B(yǎng)技術可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術*的環(huán)節(jié),而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。通過細胞培養(yǎng)得到大量的細胞或其代謝產(chǎn)物。因為生物產(chǎn)品都是從細胞得來,所以可以說細胞培養(yǎng)技術是生物技術中核心、基礎的技術。
  細胞培養(yǎng)服務的細胞培養(yǎng)具體步驟和要求以及注意事項:
  一、復蘇
  1、把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
  2、把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。
  3、把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
  4、標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
  5、3天換一次培養(yǎng)基。
  二、傳代
  1、培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
  2、把原有培養(yǎng)基吸掉。
  3、加適當?shù)囊鹊癰酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。
  4、細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
  5、用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
  6、把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。
  7、倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細胞都吹起來。
  8、根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
  三、凍存
  把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
  凍存液的配制:70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
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