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大鼠卵母細(xì)胞的采集及發(fā)育分型

更新時(shí)間:2025-04-01      點(diǎn)擊次數(shù):288

大鼠超排可以用于研究環(huán)境污染物或藥物對(duì)生殖系統(tǒng)的毒性影響;通過(guò)誘導(dǎo)超排并觀察卵母細(xì)胞和胚胎的發(fā)育情況,可以評(píng)估潛在的生殖毒性。大鼠卵母細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程可以分為3個(gè)階段:GV期、MI期、MⅡ期。

方法

1.雌性SD大鼠,腹腔注射PMSG 60IU,注射PMSG 46-48h后,腹腔注射hCG 20IU,誘導(dǎo)超排。

2.準(zhǔn)備卵母細(xì)胞培養(yǎng)滴:在60mm培養(yǎng)皿內(nèi)做若干水滴狀的滴,并用礦物油覆蓋,放入培養(yǎng)箱(37 ℃、5%CO2)平衡4h以上(推薦過(guò)夜平衡)。

3.卵母細(xì)胞采集的時(shí)間通常在SD大鼠注射hCG后13-16h內(nèi)進(jìn)行。

4.雌性SD大鼠背部、腹側(cè)備皮,酒精消毒背側(cè)、腹側(cè)皮膚。在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開(kāi)皮膚、肌肉,可見(jiàn)白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,可見(jiàn)到粉紅色的卵巢,摘除卵巢及輸卵管,將其放入500μL的KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。

5.在體式顯微鏡下觀察到輸卵管的上部(壺腹部)有一個(gè)明顯的膨大處。用鑷子固定輸卵管,用一根1 ml注射器縱向撕開(kāi)壺腹部,用此法將其整個(gè)撕裂,卵團(tuán)會(huì)游離到KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。

6.在KSOM胚胎培養(yǎng)液中再加入同體積的透明質(zhì)酸酶溶液(0.6mg/mL),用移液槍輕輕吹打幾下,放入CO2培養(yǎng)箱中,1分鐘后取出。

7.在顯微鏡下用移卵管收集卵母細(xì)胞到卵母細(xì)胞培養(yǎng)滴中,并用剩下的液滴逐步清洗,清洗結(jié)束后放回37℃ CO2培養(yǎng)箱中。

8. GV期、MI期、MⅡ期的卵母細(xì)胞。

GV:這是卵母細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育的早期階段,卵母細(xì)胞處于減數(shù)分裂的第一次分裂前期。

MI:卵母細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂的第一次中期。

MⅡ期:這是卵母細(xì)胞成熟的最終階段,卵母細(xì)胞準(zhǔn)備好受精

注意事項(xiàng):

大鼠的輸卵管不直接與卵巢相連,而是緊貼卵巢表面,呈彎彎曲曲的形狀。大鼠輸卵管可分為漏斗部、壺腹部、峽部和子宮部。


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