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RT-PCR實驗

簡要描述:RT-PCR實驗(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。

  • 更新時間:2022-12-23
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詳細介紹

RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用,從RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下擴增合成目的片段。RT—PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛,可用于檢測細胞中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉(zhuǎn)錄的RNA產(chǎn)物。無論使用何種RNA,關(guān)鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。用于反轉(zhuǎn)錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT及基因特異性引物中的一種。對于短的不具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的真核細胞mRNA,3種都可。

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