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流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期

更新時(shí)間:2022-05-19      點(diǎn)擊次數(shù):1976

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期


1。實(shí)驗(yàn)原理  

     流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期,通常用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染細(xì)胞核。PI在一定波長(zhǎng)的光下發(fā)出熒光,其強(qiáng)度與DNA含量成正比。通過流式細(xì)胞儀分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù),可檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡。


2。流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞周期步驟  

     收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,計(jì)數(shù),以(1~5)×105/孔接種于6孔板,置37℃,5CO2條件下培養(yǎng)過夜,使細(xì)胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液,各孔分別加入含有0、80、400、200010000 mg/L不同濃度茶氨酸的細(xì)胞培養(yǎng)液2 mL/孔,繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng);每24 h同法換液一次。每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)。  48 h后,中止培養(yǎng),胰酶消化后,收集細(xì)胞于流式管1000 r/min離心5min,棄上,冷PBS洗滌細(xì)胞3次,離心去上清;  一邊震蕩一邊向細(xì)胞沉淀中加入70%預(yù)冷乙醇混勻,4℃固定18 h以上;離心,棄去乙醇上清,加入預(yù)冷的PBS洗沉淀1次,離心去上清;  加入RNA酶(50 mg/L10 μL/孔和PI50 mg/L300 μL/孔,震蕩混勻。室溫、避光反應(yīng)30 min;  流式細(xì)胞儀進(jìn)行DNA檢測(cè),用Modifit軟件分析各時(shí)相細(xì)胞周期的比例。


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